午夜性无码专区,丰满人妻熟妇乱又仑精品,国产精品99久久久久久猫咪,被夫の上司に犯中文字幕

服務(wù)咨詢熱線:

021-66030766

TECHNICAL ARTICLES

技術(shù)文章

當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章蛋白質(zhì)的分離純化方法介紹

蛋白質(zhì)的分離純化方法介紹

更新時(shí)間:2015-05-14點(diǎn)擊次數(shù):1629

(一)根據(jù)配體特異性的分離方法-親和色譜法

親和層析法(aflinity chromatography)是分離蛋白質(zhì)的一種極為有效的方法,它經(jīng)常只需經(jīng)過一步處理即可使某種待提純的蛋白質(zhì)從很復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物中分離出來,而且純度很高。這種方法是根據(jù)某些蛋白質(zhì)與另一種稱為配體(Ligand)的分子能特異而非共價(jià)地結(jié)合。其基本原理:蛋白質(zhì)在組織或細(xì)胞中是以復(fù)雜的混合物形式存在,每種類型的細(xì)胞都含有上千種不同的蛋白質(zhì),因此蛋白質(zhì)的分離(Separation),提純(Purification)和鑒定(Characterization)是生物化學(xué)中的重要的一部分,至今還沒的單獨(dú)或一套現(xiàn)成的方法能移把任何一種蛋白質(zhì)從復(fù)雜的混合蛋白質(zhì)中提取出來,因此往往采取幾種方法聯(lián)合使用。

(二)根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小的差別的分離方法

1、透析與超濾

透析法是利用半透膜將分子大小不同的蛋白質(zhì)分開。

超濾法是利用高壓力或離心力,強(qiáng)使水和其他小的溶質(zhì)分子通過半透膜,而蛋白質(zhì)留在膜上,可選擇不同孔徑的瀘膜截留不同分子量的蛋白質(zhì)。

2、凝膠過濾法

也稱分子排阻層析或分子篩層析,這是根據(jù)分子大小分離蛋白質(zhì)混合物zui有效的方法之一。柱中zui常用的填充材料是葡萄糖凝膠(Sephadex ged)和瓊脂糖凝膠(agarose gel)。

(三)根據(jù)蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)進(jìn)行分離

蛋白質(zhì)在不同pH環(huán)境中帶電性質(zhì)和電荷數(shù)量不同,可將其分開。

1、電泳法

各種蛋白質(zhì)在同一pH條件下,因分子量和電荷數(shù)量不同而在電場中的遷移率不同而得以分開。值得重視的是等電聚焦電泳,這是利用一種兩性電解質(zhì)作為載體,電泳時(shí)兩性電解質(zhì)形成一個(gè)由正極到負(fù)極逐漸增加的pH梯度,當(dāng)帶一定電荷的蛋白質(zhì)在其中泳動(dòng)時(shí),到達(dá)各自等電點(diǎn)的pH位置就停止,此法可用于分析和制備各種蛋白質(zhì)。

2、離子交換層析法

離子交換劑有陽離子交換劑(如:羧甲基纖維素;CM-纖維素)和陰離子交換劑(二乙氨基乙基纖維素;DEAE?FONTCOLOR: black; FONT-SIZE: 10.5pt;">宋體" LANG="ZH-CN">纖維素),當(dāng)被分離的蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)離子交換層析柱時(shí),帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質(zhì)被吸附在離子交換劑上,隨后用改變pH或離子強(qiáng)度辦法將吸附的蛋白質(zhì)洗脫下來。

(四)根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同的分離方法

1、蛋白質(zhì)的鹽析

中性鹽對蛋白質(zhì)的溶解度有顯著影響,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,蛋白質(zhì)的溶解度增加,此稱鹽溶;當(dāng)鹽濃度繼續(xù)升高時(shí),蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現(xiàn)象稱鹽析,將大量鹽加到蛋白質(zhì)溶液中,高濃度的鹽離子(如硫酸銨的SO4NH4)有很強(qiáng)的水化力,可奪取蛋白質(zhì)分子的水化層,使之失水",于是蛋白質(zhì)膠粒凝結(jié)并沉淀析出。鹽析時(shí)若溶液pH在蛋白質(zhì)等電點(diǎn)則效果更好。由于各種蛋白質(zhì)分子顆粒大小、親水程度不同,故鹽析所需的鹽濃度也不一樣,因此調(diào)節(jié)混合蛋白質(zhì)溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質(zhì)分段沉淀。

影響鹽析的因素有:(1)溫度:除對溫度敏感的蛋白質(zhì)在低溫(4度)操作外,一般可在室溫中進(jìn)行。一般溫度低蛋白質(zhì)溶介度降低。但有的蛋白質(zhì)(如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白)在較高的溫度(25度)比0度時(shí)溶解度低,更容易鹽析。(2pH值:大多數(shù)蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)在濃鹽溶液中的溶介度zui低。(3)蛋白質(zhì)濃度:蛋白質(zhì)濃度高時(shí),欲分離的蛋白質(zhì)常常夾雜著其他蛋白質(zhì)地一起沉淀出來(共沉現(xiàn)象)。因此在鹽析前血清要加等量生理鹽水稀釋,使蛋白質(zhì)含量在2.5-3.0%。

蛋白質(zhì)鹽析常用的中性鹽,主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。其中應(yīng)用zui多的硫酸銨,它的優(yōu)點(diǎn)是溫度系數(shù)小而溶解度大(25度時(shí)飽和溶液為4.1M,即767/升;0度時(shí)飽和溶解度為3.9M,即676/升),在這一溶解度范圍內(nèi),許多蛋白質(zhì)和酶都可以鹽析出來;另外硫酸銨分段鹽析效果也比其他鹽好,不易引起蛋白質(zhì)變性。硫酸銨溶液的pH常在4.5-5.5之間,當(dāng)用其他pH值進(jìn)行鹽析時(shí),需用硫酸或氨水調(diào)節(jié)。

蛋白質(zhì)在用鹽析沉淀分離后,需要將蛋白質(zhì)中的鹽除去,常用的辦法是透析,即把蛋白質(zhì)溶液裝入秀析袋內(nèi)(常用的是玻璃紙),用緩沖液進(jìn)行透析,并不斷的更換緩沖液,因透析所需時(shí)間較長,所以在低溫中進(jìn)行。此外也可用葡萄糖凝膠G-25G-50過柱的辦法除鹽,所用的時(shí)間就比較短。

2、等電點(diǎn)沉淀法

蛋白質(zhì)在靜電狀態(tài)時(shí)顆粒之間的靜電斥力zui小,因而溶解度也zui小,各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)有差別,可利用調(diào)節(jié)溶液的pH達(dá)到某一蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)使之沉淀,但此法很少單獨(dú)使用,可與鹽析法結(jié)合用。

3、低溫有機(jī)溶劑沉淀法

用與水可混溶的有機(jī)溶劑,甲醇,乙醇或丙酮,可使多數(shù)蛋白質(zhì)溶解度降低并析出,此法分辨力比鹽析高,但蛋白質(zhì)較易變性,應(yīng)在低溫下進(jìn)行。

上一個(gè):凝膠成像工作原理及使用方法

返回列表

下一個(gè):蛋白質(zhì)組學(xué)研究系列儀器及軟件

国产大人和孩做爰bd| 机长脔到她哭h粗话h动漫| 农村熟妇高潮精品a片| 女人18毛片A级毛片嫰阝| 无套内谢少妇毛片a片软件| 边做边爱完整版免费视频播放 | 无码国产一区二区三区四区| 日韩精品久久久肉伦网站| 国产丰满老熟女重口对白| 久久夜色精品国产嚕嚕亚洲av| 女性高爱潮AAAA级视频免费| 伊人婷婷色香五月综合缴缴情 | 老公一到晚上就日不停| 久久精品国产亚洲一区二区| 国精产品一品二品国精破解| 一区二区亚洲精品国产精华液| 初六苏梅全文免费阅读正版 | 天堂资源8在线| 欧美黑人狂躁日本妞免费视频| 日韩精品成人无码专区免费| 伊人热热久久原色播放www| 含着她两个硕大的乳峰| 国产h视频在线观看| 婷婷伊人久久大香线蕉av| a级a片少妇高潮喷水片| 日韩精品久久久肉伦网站| 久久日一线二线三线品牌| 成人免费毛片aaaaaa片| 欧美《熟妇的荡欲》在线观看| 精品人妻码一区二区三区| 纯爱无遮挡h肉动漫在线播放| 男男做爰猛烈叫床视频gv| 欧美被狂躁高潮a片视频| 亚洲免费在线观看| 蜜桃麻豆WWW久久囤产精品 | 国产精品成人VA在线播放| 一区二区三区视频| 国产特级毛片aaaaaa| 好硬啊进一得太深了a片| 极品妇女扒开粉嫩小泬| 国产乱子伦精品免费无码专区|